10000拍拍18勿入免费看,地址一地址二地址三,无码国产精成人午夜视频不卡,久久久久人妻一区二区三区VR

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn),四步簡(jiǎn)單操作,小白也輕松上手!

ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn),四步簡(jiǎn)單操作,小白也輕松上手!

更新時(shí)間:2023-07-10   更新時(shí)間:2023-07-10   點(diǎn)擊次數(shù):1258次

  免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。本文將介紹免疫熒光實(shí)驗(yàn)的新方法;此文將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞(Rat1)的單個(gè)實(shí)驗(yàn)案例。然后再用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架,并用DAPI對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。  

  

58e9b15026fa1994f07e32cd074a6857.jpg

  

  細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)包括四個(gè)主要步驟:

  

7f8da2af79d0c2475ba6545ac4c2b9df.png

   

  1、培養(yǎng)

  

  • 在無(wú)菌條件下打開(kāi) μ-Slide VI 0.4、ibiTreat (80606) 的包裝,并將其放在 μ-Slide 架 (80003) 上。

  

  • 在每個(gè)通道中加入 30 μl 3x105細(xì)胞/ml 大鼠成纖維細(xì)胞(Rat1)細(xì)胞懸液。如下圖所示或我們的網(wǎng)站上所示,直接將移液器加入通道。  

  

df5e836459a27d19c63ba9601a36ea96.png

  

  • 用隨附的蓋子蓋住。

  

  • 將載玻片放入培養(yǎng)箱 (37 °C; 5% CO2) 培養(yǎng)并讓細(xì)胞附著 (60 分鐘)。然后用 60 μl 無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基填充兩個(gè)通道口。

  

  • 孵育過(guò)夜。

  

  2、固定和透化

  

  在固定和透化過(guò)程中要小心,通道永遠(yuǎn)不要變干!通過(guò)用下一個(gè)沖洗剩余的溶液來(lái)交換通道中的液體

  

  固定:

  

  • 使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置從所有通道口中吸出培養(yǎng)基。用 Dulbecco PBS 洗滌細(xì)胞,方法是將 200 μl 緩慢加入每個(gè)通道的一個(gè)空通道口,并從每個(gè)通道的相對(duì)通道口吸出。不要吸出整個(gè)通道體積。

  

  • 用約 100 μl 3.7% 多聚甲醛的 PBS 固定細(xì)胞。20 分鐘后,通過(guò)用 200 μl PBS 填充一孔并從另一孔中吸出來(lái)沖洗通道內(nèi)的液體;確保通道-不干涸。

  

  透化和封閉:

  

  • 如上所述,用 200 μl PBS 再次洗滌細(xì)胞。

  

  • 在 PBS 中用 ~100 μl 0.1% Triton® X-100 3-5 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  • 用 ~100 μl 封閉溶液(PBS 中的 1% BSA)20 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  3、染色

  

  • 使用抽吸裝置從通道中取出所有液體。不要讓通道變干。

  

  • 吸液后立即加入 30 μl Alexa Fluor® 488 鬼筆環(huán)肽(在 200 μl PBS 和 1% BSA 中)。用 1 毫升注射器注射溶液會(huì)有所幫助。在室溫下孵育 20 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  • 用 30 μl DAPI (0.1 μg/ml) 3-5 分鐘。

  

  • 用 PBS 清洗細(xì)胞并應(yīng)用 ibidi 封固培養(yǎng)基,直到通道被填滿(約 50 μl)。ibidi 封固劑以甘油為基礎(chǔ),并含有用于抗褪色的 DABCO。載玻片可存放約4 周。

  

  4、成像

  

  在熒光顯微鏡下選擇適當(dāng)?shù)臑V鏡,也可以使用浸油觀察細(xì)胞。  

  

fc21f585fc9c29df0cf03f96113fa4ce.png

  

  之所能如此簡(jiǎn)便完成免疫熒光實(shí)驗(yàn),是因?yàn)檫@些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質(zhì),絕大多數(shù)細(xì)胞可以直接貼壁生長(zhǎng),而不需要另外包被。同時(shí),這些耗材的底部薄如蓋玻片,可以直接使用倒置顯微鏡進(jìn)行觀察,得到高質(zhì)量的成像,適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。

  

  實(shí)驗(yàn)例子:

  

  超分辨率顯微鏡 (STED)觀察肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架

  

  μ-Slide VI 0.4與超分辨率顯微鏡方法兼容,使用 LifeAct-TagGFP2 蛋白,可以詳細(xì)觀察肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中,固定的 Rat1 成纖維細(xì)胞與 LifeAct-TagGFP2 蛋白一起在 μ-Slide VI 0.4,ibiTreat中孵育。并用 STED 顯微鏡以創(chuàng)建超分辨率圖像。  

  

7089c91201fa7622d4de280361b2f26f.jpg

  

  使用LifeAct-TagGFP2 蛋白對(duì) Rat1 成纖維細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架進(jìn)行超分辨率顯微鏡檢查。使用 Plan-Neofluar 100x/1.4 物鏡在 STEDYCON 超分辨率 STED 納米顯微鏡系統(tǒng)(Abberior Instruments GmbH,德國(guó)哥廷根)上進(jìn)行顯微鏡檢查。

  

  μ-Slide VI 0.4用于獲取人 BJ 成纖維細(xì)胞的共聚焦圖像。用 Drp-1 siRNA 轉(zhuǎn)染細(xì)胞并用 MitoTracker Red 染色以觀察融合的線粒體。在 ibidi μ-Slide VI 0.4中培養(yǎng)的人 BJ 成纖維細(xì)胞的共聚焦顯微鏡圖像。MitoTracker Red(紅色)用于可視化線粒體。

  

87fca11e190f57f70c2e6bb4a931cb5f.jpg

聯(lián)


我的世界珍妮视频完整版在线观看 | 成人白浆超碰人人人人| 久久久国产精品消防器材 | 国产又黄又大又粗视频| 下乡供我的发泄村妇| А√天堂资源中文| おっさんとわたし天堂的资源| 最近最新高清中文字幕| 久久人人爽人人片AV人成| 亚洲 成人 综合 另类 图区| 孩交精品xxxx视频视频| 亚洲春色av无码专区456| 亚洲 日本 欧美 中文幕| 永久免费AV无码网站在线观看| 色欲色香天天天综合无码WWW| 国产精品久久久久久亚洲毛片| 把她日出水了好紧大爽了视频| 玩弄人妻少妇老师美妇厨房| 欧美性色19p| 日韩精品无码一区二区三区不卡| 中文资源在线官网| 办公室风雨全文阅读| 亚洲午夜精品久久久久久浪潮| 荡公乱妇刘大爷和小芳| 成全视频在线观看免费高清| 日本乱偷中文字幕| 男同gv在线观看免费| 精品无码国产自产拍在线观看蜜 | 入禽太深免费观看| 久久久久亚洲av无码专区网站| 迎合疯狂肉伦耕耘播种| Y111111少妇影院无码| 九色少妇丨porny丨蝌蚪| 我把五十老女人弄高潮了| 色琪琪av中文字幕一区二区| 无码人妻一区二区三区免费视频 | 亚洲欧美一区二区成人片| 猛烈h继攵禁忌h| 日本人69XXX| 欧美日本精品一区二区三区| 国产99久久精品一区二区|