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可視化Transwell細胞趨化實驗前的攻略指南

更新時間:2023-12-07   更新時間:2023-12-07   點擊次數(shù):999次

  細胞的趨化性被描述為細胞向趨化劑的定向遷移;趨化作用是無向的細胞遷移,在細胞經(jīng)歷趨化作用時,它們會因某種物質而改變細胞的遷移速度但不會改變其遷移方向。

  

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  開始實驗前需要確認的問題:為了正確設置趨化性測定,需要先確認以下幾個重要問題。

  

  1.您打算研究哪種細胞類型?

  

  了解您感興趣的細胞類型--包括培養(yǎng)基要求和遷移速度--對于后續(xù)的檢測計劃至關重要。

  

  2.所分析的細胞類型的遷移速度是多少?

  

  雖然有些細胞遷移速度較慢(如腫瘤細胞或成纖維細胞),但其他類型的細胞(如白細胞)遷移速度非常快。細胞遷移速度將決定實驗的持續(xù)時間和圖像之間所需的間隔。此外,梯度穩(wěn)定性必須足夠高,以適應實驗的總持續(xù)時間。ibidi µ -Slide Chemotaxis 細胞趨化載玻片適用于慢速和快速遷移細胞的趨化性分析。


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  3.培養(yǎng)基是什么?

  

  大多數(shù)細胞類型在含有胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng),但它卻含有許多可以影響細胞遷移的因素,因此可能會改變趨化性測定的結果。例如,趨化劑對細胞遷移的影響可以被FCS誘導的影響所掩蓋。在開始測定之前逐漸降低培養(yǎng)基中的FCS濃度是克服這個問題的一種方法。此外,還開發(fā)了不含F(xiàn)CS的特殊無血清培養(yǎng)基。在開始測定之前,必須測試每種感興趣細胞類型的最佳培養(yǎng)基成分。

  

  4.感興趣的細胞類型的最佳接種密度是多少?

  

  接種密度取決于許多細胞因素,例如增殖速率、行為、形狀、上皮或間充質狀態(tài)以及對細胞與細胞接觸的依賴性。此外,在確定最佳細胞接種密度時必須考慮實驗持續(xù)時間。為了有足夠的可追蹤細胞,開始實驗時密度不能太低。在實驗結束時,單細胞應該是清晰可定義和可追蹤的??紤]到這些因素,在開始趨化性測定之前,應分別確定每種細胞類型的最佳接種密度。

  

  5.應該進行多少次實驗?

  

  通常,三到五次重復實驗足以從趨化組和相應的對照組創(chuàng)建重要數(shù)據(jù)。每個實驗應包含20-40個單細胞的跟蹤數(shù)據(jù),這可以使用低放大倍率顯微鏡物鏡(例如5倍或10倍)來實現(xiàn)。

  

  6.應該進行2D或3D趨化性分析嗎?

  

  大多數(shù)細胞自然嵌入3D矩陣中。在趨化性測定過程中在2D環(huán)境中培養(yǎng)它們可能會改變它們的行為和遷移能力。為了克服這個問題,可以將細胞嵌入模仿其自然環(huán)境的3D基質中,例如膠原蛋白、基質膠或其他水凝膠。而細胞趨化載玻片非常適合2D和3D實驗。

  

  7.實驗中必須包括哪些對照?

  

  為了正確分析趨化性實驗,至關重要的是包括不含任何趨化劑的陰性對照 (-/-),以及整個室中含有趨化劑的陽性對照 (+/+)。

  

  在使用細胞趨化載玻片時,由于梯度以外的所有條件都是對稱的,因此需要較少的控制測量。這允許相互獨立地分析趨化性和趨化運動。在該實例中,趨化劑誘導癌細胞的趨化性和趨化運動。


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